問題詳情：
微生物的生長繁殖需要不同種類的碳源、氮源、無機鹽、生長因子等營養物質，若培養基中的某種營養物質不能被微生物利用，微生物便不能生長。根據這一特*，可將微生物接種在只缺少某種營養物質的基礎培養基中，再將所缺的營養物質點植於平板上，該營養物質便逐漸擴散於植點周圍。該微生物若需要此種營養物質，便在這種營養物質擴散處生長繁殖，形成肉眼可見的菌落圈，這種測定微生物營養需求的方法稱爲生長譜法。某興趣小組嘗試用生長譜法測定某種大腸桿菌對糖類（碳源）的需求情況，*作流程如下：
Ⅰ．培養基的製備。該小組所用無碳培養基*如下（加水定容至1L）：
成分 | NaCl | KH2PO4 | K2HPO4 | （NH4）2SO4 | MgSO4·7H2O | 瓊脂 |
質量（g） | 1 | 0．5 | 0．5 | 2 | 0．2 | 20 |
同時配製質量分數爲10%的葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖溶液各50mL。
Ⅱ．將大腸桿菌懸液與溶化並冷卻至50℃的固體培養基混勻，倒平板。
Ⅲ．將已凝固的平板背面用記號筆劃分爲四個區，並註明要點植的糖類名稱。
Ⅳ．透過無菌*作分別加入蘸有不同糖類的無菌濾紙片，待平板吸收乾燥後倒置培養24小時。
結合所學知識回答相關的問題：
（1）無碳培養基*中加入（NH4）2SO4的目的是___________。對培養基及糖溶液通常採用的滅菌方法是___________。倒平板後用___________法進行接種。
（2）該小組發現最終在培養基的四個區內均有菌落圈產生，但大小不同，據此得到的初步結論是___________。
（3）如果在此實驗中發現某一不被該大腸桿菌利用的碳源的點植區域也長出菌落圈，試分析可能的原因（寫出2條即可）______。
（4）生長譜法還可用於某些營養缺陷型菌株（失去合成某種生長因子能力的菌株）的篩選和鑑定，例如大腸桿菌經紫外線誘變處理後會產生一些營養缺陷型突變個體，現已純化並製備出某營養缺陷型的菌懸液，但不清楚是氨基*缺陷型、維生素缺陷型還是氨基*—維生素缺陷型，請簡要寫出用生長譜法進行鑑定的思路，並預期可能的結果及結論_____。
【回答】
(1). 提供氮源 (2). 高壓蒸汽滅菌 (3). 稀釋塗布平板 (4). 大腸杄菌可以利用四種糖類（葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、乳糖）作爲碳源，但利用的程度不同 (5). 有雜菌混入；該大腸桿菌發生了突變；該大腸桿菌可能會利用瓊脂多糖 (6). 將菌懸液與溶化並冷卻至50℃的不含氨基*和維生素的基礎培養基混勻，倒平板；將培養基劃分成兩個相等的區域A、B；A區點植氨基*、B區點植維生素；在適宜溫度下培養，觀察菌落產生的區域。若菌落只在A區產生，則爲氨基*缺陷型；若菌落只在B區產生，則爲維生素缺陷型；若菌落產生在AB交界處，則爲氨基*—維生素缺陷型
【解析】
培養基一般含有水、碳源、氮源、無機鹽等。
常用的接種方法：平板劃線法和稀釋塗布平板法。
常用的滅菌方法：乾熱滅菌法、灼燒滅菌法、高壓蒸汽滅菌法。
【詳解】（1）培養基中的（NH4）2SO4可以提供氮源。常用高壓蒸汽滅菌法對培養基及糖溶液進行滅菌。倒平板後常用稀釋塗布平板法進行接種。
（2）培養基的四個區中含有不同的糖類，若在培養基的四個區內均有菌落圈產生，說明大腸桿菌可以利用四種糖類，但大小不同，說明大腸桿菌對四種糖類的利用程度不同。
（3）如果在此實驗中發現某一不被該大腸桿菌利用的碳源的點植區域也長出菌落圈，可能是有雜菌混入或該大腸桿菌發生了突變。
（4）要透過生長譜法探究大腸桿菌屬於氨基*缺陷型、維生素缺陷型還是氨基*—維生素缺陷型，可以將菌懸液與溶化並冷卻至50℃的不含氨基*和維生素的基礎培養基混勻，倒平板；將培養基劃分成兩個相等的區域A、B；A區點植氨基*、B區點植維生素；在適宜溫度下培養，觀察菌落產生的區域。若菌落只在A區產生，則爲氨基*缺陷型；若菌落只在B區產生，則爲維生素缺陷型；若菌落產生在AB交界處，則爲氨基*—維生素缺陷型。
【點睛】本題的難點在於透過生長譜法探究大腸桿菌屬於氨基*缺陷型、維生素缺陷型還是氨基*—維生素缺陷型，選擇的培養基應該不含氨基*和維生素，在兩個區分別點上氨基*和維生素，觀察菌落的產生情況。
知識點：微生物的利用
題型：綜合題
